該樣品制備技術的核心原理其實很簡單：

• 甲醇固定：用甲醇將植物組織（如葉片、花粉）固定到E3或E4 Tips/Filter中的膜上，同時細胞膜變得通透，細胞內蛋白質凝固，這一步使得后續加入的還原、烷基化、酶解試劑進入細胞內部；

• 濾膜上處理：在E3或E4 Tips/Filter中的濾膜上完成蛋白質的還原、烷基化和酶解；

• 質譜檢測：酶解后的肽段通過洗脫、脫鹽后，即可進行LC-MS/MS分析，無需額外的復雜步驟。
  

整個流程實現了 “單容器操作"，不僅省去了機械破碎細胞的過程，還將樣本處理時間從傳統的數小時縮短到24小時內（其中大部分是酶解的等待時間，實際操作時間僅需1-2小時）。

為了驗證 “細胞內蛋白質組學" 樣本處理技術的優勢，研究團隊以擬南芥、本氏煙草、玉米、高粱等種類植物為研究對象，將其與傳統的SDS裂解、TFA裂解方法行了全面對比。結果令人驚喜，新技術的表現遠超預期！

蛋白質鑒定深度更高、定量準確性和重復性更好

在葉片樣本分析中，OFIC樣本處理技術通過單次LC-MS/MS分析，就能從擬南芥葉片中鑒定出約9600種蛋白質，玉米葉片中鑒定出8600種蛋白質，本氏煙草葉片中更是鑒定出12000種蛋白質——這樣的分析結果遠超傳統SDS裂解方法（通常單次分析僅能鑒定出5000-7000種蛋白質）。

分析結果顯示，OFIC技術的蛋白質組定量分析變異系數（CV）僅為15%左右，樣本間的皮爾遜相關系數接近0.97，遠優于傳統SDS裂解方法（CV約20%，相關系數0.92）和TFA裂解方法（CV約30%，相關系數0.85）。這意味著新技術能更精準地捕捉樣本間的蛋白質表達差異，為后續的差異表達分析提供更可靠的數據基礎。

對于更難處理的花粉樣本，新方法同樣表現出色：僅需1/10朵本氏煙草花的花粉，或2朵擬南芥花的花粉，就能分別鑒定出8500種和6400種蛋白質，而傳統方法往往需要大量花粉才能完成分析，且蛋白質鑒定數量不足5000種。

傳統方法處理植物葉片通常需要至少100mg的新鮮組織，而OFIC新方法僅需1/4片葉片（約25mg）就能完成分析；對于花粉這類微量樣本，新方法的優勢更為明顯——僅需微量花粉就能滿足實驗需求，解決了珍稀樣本樣本量少難以分析的困難。

“細胞內蛋白質組學"樣本處理技術的出現，不僅解決了傳統方法的諸多痛點，還大大降低了蛋白質組學樣本處理的技術門檻。研究團隊表示，這種方法還可應用于其他植物組織或其他類型蛋白質組學樣本。